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成骨誘導(dǎo)測定ALP問題？

發(fā)布時間：2014/2/8 10:20:15　瀏覽次數(shù)：4339　[字號：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁　打印此頁]

我想咨詢幾個問題： 

（1）我做成骨誘導(dǎo)測ALP活性，應(yīng)該是測培養(yǎng)基上清的ALP還是細胞內(nèi)的ALP？

（2）測細胞內(nèi)ALP的話如何裂解細胞提蛋白？

（3）是否需要測上清或細胞內(nèi)總蛋白濃度進行標(biāo)準(zhǔn)化？

回復(fù)：

從我們這邊接觸的樣本測定來說，測定細胞中ALP活力相對比培養(yǎng)液中的要好一些；比較細胞代謝方面優(yōu)于培養(yǎng)液，只有當(dāng)細胞破碎或者透性增大，才會釋放到培養(yǎng)液中。

細胞樣本需要進行破碎處理，推薦方法物理破碎，如勻漿、超聲等；化學(xué)裂解法建議選擇相對溫和的裂解液；成分不宜過于復(fù)雜，防止成分的干擾。

測定細胞中ALP需要盡心蛋白定量；如果是培養(yǎng)液，則不需要進行蛋白定量。

 

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