有關羥自由基試劑盒的幾個問題
發布時間:2014/2/8 9:23:05 瀏覽次數:3261 [字號:大 中 小] [關閉此頁 打印此頁]
近期對其中相關指標進行了探索,對其中有些問題心存疑惑,考慮到近期試驗的需要,望盡快解答。
有關羥自由基試劑盒的幾個問題:
第一,多次試驗發現實驗數據(包括標準管、對照管等)的平行性不是很好,不同時間測定相應結果有時相差較大,請問這點如何解決?
第二,考慮到羥自由基本身的一些原因,請問測定中主要需注意什么問題???比如測定時間,測定條件等。
第三,在探索最佳濃度時,發現同樣存在平行性較差的情況,而且,再次探索最佳濃度時,發現最佳濃度發生了變化。請問是不是此后每次試驗前必須先進行最佳濃度的探索,而后才能進行正式樣品的大批量測定?
有關GR(谷胱苷肽還原酶)的測定:
近期試驗發現,2分30秒測定的吸光度與30秒測定的吸光度差值較小,一般在0.005左右,考慮到染毒試驗,請問染毒后差值是否會有顯著變化?也就是GR活性是否會有較顯著變化?
回復:
羥自由基試劑盒操作確實要求較高,由于反應時間較短,對樣本加入量的準確性,控制反應的時間,要求都較高!同時樣本的穩定性也不好,所以制備好勻漿后(破碎細胞后),2-8℃冷藏盡快完成檢測(不可過夜)!
批量檢測之前需要做預實驗確定最佳樣本濃度!查我們檢測記錄,出現平行較差的情況,一般有3點:1、樣本及試劑二加入量有誤差;2、反應時間控制有偏差;3、樣本存放時間偏長,勻漿不均一,導致加樣有偏差!
GR測定,如果2次OD變化值太小,也就是樣本中的GR表達較低,如需改善,一般有2點:1、加大樣本濃度或取樣量;2、延長反應時間!
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